Cianobacteria Anabaena Sp.: noviembre 2011

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Aislamiento: Separación de microorganismos de su medio natural o de microorganismos distintos.

Biofertilizantes: Organismos vivos que son usados en agricultura como fertilizantes. Son naturales y no contaminantes para el medio ambiente.

Bloom: Crecimiento denso de algas planctónicas que dan un color característico a la masa de agua.

Tricomas: Conjunto formado por las células ordenadas de forma lineal de una cianobacteria filamentosa.

Exopolisacaridos: Carbohidratos formados por tres o más azucares simples, localizados fuera de la pared bacteriana.

Biofertilizantes: Organismos vivos que son usados en agricultura como fertilizantes. Son naturales y no contaminantes para el medio ambiente.

Caracterización: Recopilación de los datos básicos de microorganismos para su identificación.

Exopolisacáridos: Carbohidratos formados por tres o más azúcares simples, localizados fuera de la pared bacteriana.

Fitoplancton: Conjunto de los organismos acuáticos autótrofos, que tienen capacidad fotosintética y que viven dispersos en el agua.

Inhibición: Es la suspensión de una función o actividad del organismo mediante la activación de un estímulo.

Microalgas: Organismos fotoautótrofos obligados, es decir, requieren de la energía proveniente de la luz para realizar sus procesos biológicos. Forman parte del fitoplancton.

Tricoma: Conjunto formado por las células ordenadas de forma lineal de una Cianobacteria filamentosa.

Material a utilizar

Material:

Filtros con miliporos de una medida de 8 micrómetros
Micro pipeta
Medio de cultivo BG-110
Microscopio Óptico
Hisopo delgado
Mecheros
Placas Petri
Cámara de crecimiento

Focos fluorescentes

Aireador aquafish 500
Cristal violeta
Portaobjetos
Agua destilada
Toallitas de Papel
Decolorante (mezcla de alcohol acetona)
Microscopio compuesto
Safranina
ASAS BacteriológicasPuente de Tinción y Cristalizador
Mechero de Fisher

Pruebas de identificación

Se deben tomar datos cada tercer día para un mejor control, al igual que siempre tiene que estarce monitoreando la temperatura. La fuente de luz obtenida por los focos fluorescentes debe mantenerse en un periodo de 12:12 h y el oxígeno debe estar continuamente durante el crecimiento de la Anabaena sp.

Para la caracterización de la Anabaena sp. se basara en la descripción de sus características, debe ser comparada con la literatura [Manual de Bergey (Boone y Castenholz, 2001)], como soporte a la Anabaena se debe cuantificar la clorofila a, proteínas y expolisacaridos tomando una muestra del tratamiento considerando óptimo para el crecimiento de la Anabaena sp.

Descripción 1. Caracterización de la Anabaena sp.
* Las células vegetativas se encuentran en forma esférica, separadas por constricciones bien diferenciadas en la pared celular.
* Las células terminales tienen forma cónica.
* La coloración celular es verde clara con una ligera coloración azulada-
* El diámetro celular tiene un promedio de 4.64+/0.1 m.
* Los heterocistos tienen forma esférica y se encuentran de forma intercalada entre células vegetativas.
* No hay presencia de acinetos.

Descripción 2. Morfología de colonias.
* No se observa formación de colonias
* Algunos tricomas se observan rectos y otros ligeramente sinuosos y sus células terminales tienen forma cónica.
* Los heterocitos se encuentran intercaladamente con un promedio de 20+-3.61 células vegetativas entre heterocistos.

Técnicas de aislamiento

Para aislar la bacteria es recomendable utilizar el medio de cultivo BG-110, ya que es el medio específico para las cianobacterias, debido a su composición (la tabla 1. anexos). Al eliminar el NaCO3 del medio, se reduce la posibilidad de que cianobacterias no fijadoras de nitrógeno crezcan en el medio de cultivo. Para facilitar el aislamiento de Anabaena sp., se debe solidificar el medio con agar.

A partir del cultivo mixto, se debe proseguir con el aislamiento de la Anabaena. Para esto se debe utilizar un microscopio con lente de aumento 5x donde se debe identificar la colonia de Anabaena sp. en la caja Petri. Co ayuda de un hisopo delgado se debe tomar la parte de la colonia y sembrar en un nuevo medio BG-110 sólido. El aislamiento está basado en el método de Broker y Walsby.

Una vez establecida la cianobacterias en el medio de cultivo sólido (puede tardar 5 semanas), se debe de asegurar la purificación del cultivo, volviendo a colectar cepas de Anabaena sp. y cultivándolas en medio sólido.

Ya aislada la cianobacteria, se debe cultivar en un medio liquido BG-110 en cámara de crecimiento con control de temperatura, luz y aereación (tabla 2. anexos) hasta alcanzar la fase exponencial con una densidad celular de 1425 cél/L.

ANEXOS:

Componente	Composición masa (g)
K2HPO4	0.04 g
MgSO4.7H2O	0.075g
CaCl2.2H20	0.036g
Ácido citrico	0.006g
Citrato férrico de amonio	0.006g
Na2-EDTA	0.001g
Na2CO3	0.02g
Trace elemento solución	1.0g
H3BO3	2.86g
MnCl2. 4 H2O	1.81g
ZnSO4.7H2O	0.222g
Na2MoO4.2H2O	0.39g
CuSO4.5H2O	0.079g
Co(NO3)2.6H2O	0.494g
Agar -agar	10-15g

Tabla 1. Composición del medio BG-110

Condiciones de crecimiento
Temperatura	30,32 +- 1, 37°C
pH	7,82 +- 0,15
Oxigeno (mañana)	4,05 +- 0,69 mg/L
Oxigeno (tarde)	4,25 +- 0,65 mg/L

Tabla 2. Las condiciones en las cuales crecen mejor las bacterias.

Medios de cultivo a utilizar

Para iniciar el cultivo de la Anabaena sp, primero se constató la presencia en la muestra tomada con ayuda del microscopio óptico.

En la muestra extraída se debe observar un coctel de microalgas, para esto se necesita realizar un cultivo mixto donde se valla a sembrar la muestra, todo esto para hacer la identificación de la Anabaena sp. más sencilla.

Para cultivar la muestra extraída se debe filtrar con ayuda de filtros con miliporos de una medida de 8 micrómetros y hacerle múltiples lavados con un medio estéril.

Con ayuda de una micropipeta se debe tomar 1 mL de la muestra retenida en el filtro y debe sembrarse en un medio sólido y medio líquido.

Medio solido

HÁBITAT "Aislamiento del microorganismo"

La muestra se pretende aislar en la bahía de Manzanillo, ya que está catalogado como el puerto con mejor clima del Pacífico mexicano, el aislamiento será específicamente de la playa “La Boquita” debido a sus condiciones ambientales en la que esta se encuentra. Su clima es cálido (con humedad mínima), por lo que presenta una temperatura media anual entre 26° y 28° C y de 22 a 23ºC la más baja. Durante el verano se llegan a registrar temperaturas muy elevadas de 30 a 34ºC.

Se pretende recolectar la muestra durante un bloom, es decir, un crecimiento masivo de micro algas, donde domina la Anabaena sp. Para esto se tiene que buscar un cuerpo de agua que presente una pequeña coloración verdulesca y un fuerte olor a choclo, ya que estos factores son los que caracterizan a un bloom de Anabaena sp.
Al tomar la muestra no debe de olvidarse de medir la salinidad y el oxígeno disuelto.

Toma de muestra

Cianobacteria Anabaena Sp.

domingo, 27 de noviembre de 2011

REFERENCIAS

DIAGRAMA DE BLOQUES

GLOSARIO