Técnicas de aislamiento

Para aislar la bacteria es recomendable utilizar el medio de cultivo BG-110, ya que es el medio específico para las cianobacterias, debido a su composición (la tabla 1. anexos). Al eliminar el NaCO3 del medio, se reduce la posibilidad de que cianobacterias no fijadoras de nitrógeno crezcan en el medio de cultivo. Para facilitar el aislamiento de Anabaena sp., se debe solidificar el medio con agar.

A partir del cultivo mixto, se debe proseguir con el aislamiento de la Anabaena. Para esto se debe utilizar un microscopio con lente de aumento 5x donde se debe identificar la colonia de Anabaena sp. en la caja Petri. Co ayuda de un hisopo delgado se debe tomar la parte de la colonia y sembrar en un nuevo medio BG-110 sólido. El aislamiento está basado en el método de Broker y Walsby.

Una vez establecida la cianobacterias en el medio de cultivo sólido (puede tardar 5 semanas), se debe de asegurar la purificación del cultivo, volviendo a colectar cepas de Anabaena sp. y cultivándolas en medio sólido.

Ya aislada la cianobacteria, se debe cultivar en un medio liquido BG-110 en cámara de crecimiento con control de temperatura, luz y aereación (tabla 2. anexos)  hasta alcanzar la fase exponencial con una densidad celular de 1425 cél/L.

ANEXOS:

Componente	Composición masa (g)
K2HPO4	0.04 g
MgSO4.7H2O	0.075g
CaCl2.2H20	0.036g
Ácido citrico	0.006g
Citrato férrico de amonio	0.006g
Na2-EDTA	0.001g
Na2CO3	0.02g
Trace elemento solución	1.0g
H3BO3	2.86g
MnCl2. 4 H2O	1.81g
ZnSO4.7H2O	0.222g
Na2MoO4.2H2O	0.39g
CuSO4.5H2O	0.079g
Co(NO3)2.6H2O	0.494g
Agar -agar	10-15g

Tabla 1. Composición del medio BG-110 

Condiciones de crecimiento
Temperatura	30,32 +- 1, 37°C
pH	7,82 +- 0,15
Oxigeno (mañana)	4,05 +- 0,69 mg/L
Oxigeno (tarde)	4,25 +- 0,65 mg/L

Tabla 2. Las condiciones en las cuales crecen mejor las bacterias.